Video: Quanto costa trasformare una legatura?
2024 Autore: Miles Stephen | [email protected]. Ultima modifica: 2023-12-15 23:37
Trasformazione . Aggiungere tra 1-5 µl di legatura miscela alle cellule competenti per trasformazione . Esteso legatura con PEG provoca un calo in trasformazione efficienza (rapida legatura Kit). L'elettroporazione è raccomandata per i costrutti di grandi dimensioni (>10.000 bp).
Di quanto prodotto di legatura ho bisogno per la trasformazione?
Trasformazione . Aggiungere tra 1-5 µl di legatura miscela alle cellule competenti per trasformazione . Esteso legatura con PEG provoca un calo in trasformazione efficienza (rapida legatura Kit). L'elettroporazione è raccomandata per i costrutti di grandi dimensioni (>10.000 bp).
Successivamente, la domanda è: cos'è la legatura e la trasformazione? In un tipico esperimento di clonazione, i ricercatori inseriscono prima un pezzo di DNA, come un gene, in un pezzo circolare di DNA chiamato plasmide. Questo passaggio utilizza enzimi di restrizione e DNA ligasi ed è chiamato a legatura . Dopo un legatura , il passo successivo è trasferire il DNA nei batteri in un processo chiamato trasformazione.
Successivamente, ci si potrebbe anche chiedere, quanto DNA è necessario per una legatura?
La concentrazione complessiva di vettore + inserto dovrebbe essere compresa tra 1-10 µg/ml per un'efficienza legatura . Vettore: si consigliano rapporti molari di inserto compresi tra 1:1 e 1:10 (1:3 è tipico). Se non sei sicuro di te DNA concentrazioni, eseguire più legature con rapporti variabili.
Per quanto tempo puoi conservare una reazione di legatura?
Le legature possono essere fatto a temperatura ambiente o più fresco (si pensi a 12-16°C) durante la notte o anche per alcuni giorni, se tu sei molto impegnato. Puoi anche conservare una legatura in frigo e tirarlo fuori più tardi per continuare a legare a temperatura ambiente per as lungo come necessario.
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