Video: Qual è lo scopo della purificazione del prodotto PCR?
2024 Autore: Miles Stephen | [email protected]. Ultima modifica: 2023-12-15 23:37
Purificazione di DNA da a PCR La reazione è tipicamente necessaria per l'uso a valle e facilita la rimozione di enzimi, nucleotidi, primer e componenti tampone. Tradizionalmente questo è stato ottenuto utilizzando metodi di estrazione organica, come l'estrazione con cloroformio fenolico, seguita dalla precipitazione con etanolo.
Anche la domanda è: perché è necessario purificare i prodotti della PCR?
Devi purificare i prodotti PCR eliminare primer, nucleotidi ed enzimi inutilizzati al fine di ottimizzare il successo della legatura, che manterrà e sequencerà il Prodotto di PCR . Per purificare il Prodotti per PCR , viene utilizzata la cromatografia ad esclusione dimensionale.
Inoltre, cosa devo fare dopo la PCR? Per massimizzare il recupero, sciacquare due volte la coppa del retentato con 10-20 µL di TE o acqua. Il finale PCR reazione può contenere fino a un microgrammo di DNA amplificato che può essere utilizzato per una varietà di applicazioni di biologia molecolare. Queste applicazioni possono essere più o meno sensibili ai componenti residui del PCR miscela di reazione.
Ci si potrebbe anche chiedere, come si puliscono i prodotti PCR?
Metodi classici usati per pulire su Prodotti per PCR prima del sequenziamento includono elettroforesi su gel, precipitazione con etanolo e cromatografia su colonna. Sebbene abbastanza efficaci, questi metodi possono diventare rapidamente ingombranti durante l'elaborazione di più campioni in parallelo e mostrare vari gradi di perdita di campione.
Perché il DNA deve essere pulito?
Noi pulire su DNA da soluzioni acquose per rimuovere sali tampone, enzimi o altre sostanze che potrebbero influenzare le applicazioni a valle. Gli esempi includono la reazione PCR pulire su, pulire up dopo restrizione digest e pulire up di genomico o plasmide DNA contaminato da proteine/detriti cellulari.
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