Come viene calcolata la concentrazione del DNA utilizzando lo spettrofotometro?
Come viene calcolata la concentrazione del DNA utilizzando lo spettrofotometro?

Video: Come viene calcolata la concentrazione del DNA utilizzando lo spettrofotometro?

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Anonim

concentrazione del DNA è stimato da misurando l'assorbanza a 260 nm, regolando l'A260 misura della torbidità ( misurato da assorbanza a 320 nm), moltiplicando di il fattore di diluizione, e usando la relazione che un A260 di 1,0 = 50µg/ml dsDNA puro.

La gente chiede anche, come trovi la concentrazione e la purezza del DNA?

Valutare Purezza del DNA , misurare l'assorbanza da 230 nm a 320 nm per rilevare altri possibili contaminanti. Il più comune calcolo della purezza è il rapporto tra l'assorbanza a 260 nm diviso per la lettura a 280 nm. Buona qualità DNA avrà un A260/UN280 rapporto di 1,7-2,0.

Allo stesso modo, qual è una buona concentrazione di DNA? UN Buona qualità DNA il campione dovrebbe avere A260/UN280 rapporto di 1,7-2,0 e un A260/UN230 rapporto superiore a 1,5, ma poiché la sensibilità delle diverse tecniche a questi contaminanti varia, questi valori devono essere presi solo come guida per la purezza del campione.

A questo proposito, come fa NanoDrop a calcolare la concentrazione di DNA?

Moltiplichi il valore dell'assorbanza a 260 nm per un fattore fisso (è 50 per DNA ) e ottieni il concentrazione del DNA . Ecco. (Ok tecnicamente è l'A260 di un campione di 10 mm di spessore che viene moltiplicato per 50; il NanoDrop esprime A260 come se il campione avesse uno spessore di 10 mm, come in una cuvetta standard).

Perché abbiamo dovuto usare uno spettrofotometro per quantificare il nostro DNA?

UN spettrofotometro è in grado di determinare le concentrazioni medie degli acidi nucleici DNA o RNA presente in una miscela, nonché la loro purezza. Usando la legge Beer-Lambert è possibile mettere in relazione la quantità di luce assorbita con la concentrazione della molecola assorbente.

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